免疫組化(IHC) 作為實驗必備技能之一，具有特異性強，靈敏度高，將形態(tài)、功能和定位密切結合等優(yōu)勢，現(xiàn)已成為臨床病理不可或缺的輔助手段。但其實驗步驟繁瑣，存在許多變量，經(jīng)常很難獲得最優(yōu)的結果，因此需要對一些實驗流程的變量（例如樣品制備、抗原修復以及抗體孵育時間等）進行調(diào)整實現(xiàn)優(yōu)化。
IHC實驗步驟繁瑣，包括切片制作（固定，脫水，透明，包埋，切片，貼片，烤片），脫蠟，水化，阻斷，抗原修復，封閉，一抗孵育，二抗孵育，顯色，復染，封片和分析等，在上次的推文中向您介紹了封閉和一抗孵育兩個步驟中的常見問題及解析，本次為您帶來的是二抗孵育和顯色過程中的注意事項。文末還附有IHC通關的秘密武器——Bioss全新上市的IHC即用型試劑盒，助您一次獲得CNS級的圖像結果。
二抗孵育
1.陽性檢測率及著色強度相對減弱，甚至無染色
2.圖片背景值過高
3.染色結果出現(xiàn)非特異性染色
4.DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色
顯色
1.陽性檢測率及著色強度相對減弱，甚至無染色
2.圖片背景值過高
3.產(chǎn)生深棕至黑色的DAB絮狀或團狀沉積
4.陽性檢測率及著色強度相對增強
5.切片著色不均勻，如一片著色，一片不著色或著色深淺不一
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受篇幅限制，本次IHC實驗過程中的常見問題解析就先分享到這里。如果您還想更深入的學習IHC相關問題，可以繼續(xù)關注本系列后續(xù)文章。Bioss供應科研使用高品質IHC抗體及全套配套試劑，為您提供一站式解決方案。如果您在使用我們的產(chǎn)品時出現(xiàn)任何問題，請隨時聯(lián)系我們，Bioss資深IHC實驗專家將為您全面講解，深度分析，幫助您輕松解決IHC的“疑難雜癥”！
