CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)服務(wù) 服務(wù)編號(hào)：SV1501
一. CRISPR/Cas9技術(shù)介紹
CRISPR/Cas9 是一種基于細(xì)菌天然免疫機(jī)制開(kāi)發(fā)出的基因編輯技術(shù)，用于抵御病毒等外來(lái)物入侵的一種防御機(jī)制。經(jīng)改造的CRISPR系統(tǒng)主要由Cas9蛋白和單鏈向?qū)NA（sgRNA）組成，其中sgRNA對(duì)靶序列進(jìn)行特異性識(shí)別，Cas9蛋白負(fù)責(zé)對(duì)識(shí)別的靶序列進(jìn)行切割，從而實(shí)現(xiàn)DNA的雙鏈斷裂。
DNA雙鏈斷裂后，細(xì)胞對(duì)DNA的損傷修復(fù)機(jī)制就會(huì)被激活。目前主要由兩種修復(fù)機(jī)制，非同源末端連接（NHEJ）修復(fù)和同源重組介導(dǎo)的修復(fù)（HDR）。沒(méi)有外源模板時(shí)，機(jī)體主要進(jìn)行NHEJ修復(fù)。NHEJ修復(fù)過(guò)程中，會(huì)在切割位點(diǎn)隨機(jī)的進(jìn)行缺失或插入堿基序列，導(dǎo)致DNA移碼突變，從而使基因不能正常表達(dá)。存在外源模板的情況下，機(jī)體會(huì)啟動(dòng)HDR修復(fù)來(lái)實(shí)現(xiàn)基因的精準(zhǔn)插入或者替換。
二．服務(wù)內(nèi)容與流程
服務(wù)內(nèi)容：
Tip: 請(qǐng)您填寫(xiě)項(xiàng)目申請(qǐng)表，以便Bioss為您提供更好的技術(shù)服務(wù)。
服務(wù)流程：
1. 客戶(hù)提供需要敲除的指標(biāo)信息，與公司商定具體的制備項(xiàng)目、數(shù)量和費(fèi)用，雙方簽訂《委托CRISPR/Cas9基因敲除服務(wù)合同》。
2. 雙方確定合作細(xì)節(jié)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中及時(shí)反饋實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，并按照規(guī)定時(shí)間完成委托服務(wù)。并向客戶(hù)提供委托產(chǎn)品與實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
三．技術(shù)流程
1.RNP轉(zhuǎn)染法
2.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法
四．案例結(jié)果展示
五．服務(wù)優(yōu)勢(shì)
1. 兩種敲除方法（質(zhì)粒法和RNP法）可供客戶(hù)選擇。
2. 每個(gè)靶標(biāo)設(shè)計(jì)多條sgRNA，提供多種敲除策略，最大限度的提高的KO效率，提高蛋白水平的敲除概率。
3. 通過(guò)Sanger測(cè)序后，多種軟件分析編輯效率，提高編輯結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4. 不同的細(xì)胞系具有專(zhuān)屬的轉(zhuǎn)染方案，提高靶標(biāo)編輯的效率。
